A COVID-19 diagnosztizálására jelenleg gyakorlatban alkalmazott laboratóriumi vizsgálatokat a nemzetközi szakértői testületek tanácsai szerint felülvizsgálják és értékelik.
A COVID-19 betegség, amely Wuhan Kínából származik, és eddig több mint 208 országot érintett. Az elmúlt hónapokban jelentős kihívás elé állította a tudományos közösséget az egész világon, hogy fejlődjön diagnosztikai tesztek mert Covid-19 betegségek kimutatása a betegek és a gyanús személyek kiszűrése érdekében a járvány hatékony kezelése és ellenőrzése érdekében.
Mielőtt értékelnénk a COVID-19 kimutatására használt jelenlegi módszereket és gyakorlatokat, először is ismerjük meg, mi okozza a COVID-19-et, és hogyan lehet diagnosztikai teszteket kifejleszteni a betegek e betegség szűrésére. A COVID-19 betegséget egy pozitív szálú RNS okozza vírus amelyek zoonózisosak, ami azt jelenti, hogy átjuthatnak az állatoktól az emberekig terjedő faji korlátokon, és embereknél megbetegedést okozhatnak, a megfázástól a súlyosabb betegségekig, például a MERS-ig és a SARS-ig. A COVID-19-et okozó vírust a Vírusok Taxonómiájának Nemzetközi Bizottsága (ICTV) SARS-CoV-2-nek nevezte el, mivel nagyon hasonlít a SARS-járványt (SARS-CoV) okozóhoz. A COVID-19 betegség diagnosztikai tesztje számos módon fejleszthető.
A világszerte legnépszerűbb és jelenleg alkalmazott módszer egy olyan diagnosztikai teszt kifejlesztése, amely magát a SARS-CoV-2 vírust is képes kimutatni. Ez teszt alapja a vírusgenom kimutatása a betegmintában RT-valós idejű PCR-rel (reverz transzkriptáz-valós idejű polimeráz láncreakció). Ez azt jelenti, hogy a vírus RNS-t DNS-vé alakítják egy reverz transzkriptáz nevű enzim segítségével, majd a DNS-t amplifikálják specifikus primerkészlettel és egy fluoreszcens szondával, amely a vírus DNS egy meghatározott régiójához kötődik, Taq polimeráz segítségével és a fluoreszcens jel detektálásával. Ezeket a teszteket NAAT-nak (Nucleic Acid Amplification Tests) nevezik. Ez a technika nagyon hasznos lehet a nukleinsav jelenlétének nagyon korai kimutatására a betegmintában, még azoknál a tünetmentes betegeknél is, akiknél nem jelentkeznek COVID-19 betegség tünetei (különösen a 14-28 napos lappangási időszakban) és a későbbi szakaszban. akkor is, ha a betegség kifejlődött.
Világszerte számos vállalat versenyt futott az idővel az elmúlt néhány hónapban, hogy NAAT alapú diagnosztikai tesztet fejlesszenek ki a SARS-CoV-2 kimutatására a CDC (Center for Disease Control), Atlanta, USA és a WHO irányelvei alapján. 1, 2). Az egészségügyi hatóságok világszerte jóváhagyták ezeket a teszteket sürgősségi használatra a SARS-CoV-2 kimutatására. Az eddig megcélzott vírusgének közé tartoznak az N, E, S és RdRP gének, valamint a megfelelő pozitív és negatív kontrollok. Az ilyen vizsgálathoz gyűjtendő betegminták a felső légúti traktusból (nazofaringeális és oropharyngeális tampon) és/vagy az alsó légutakból (köpetből és/vagy endotracheális aspirátumból vagy bronchoalveoláris öblítésből) származnak. Azonban más mintákban is kimutatható a vírus, beleértve a székletet és a vért is. A mintákat gyorsan, megfelelő módon kell gyűjteni, minden szükséges óvintézkedést megtéve és a biológiai biztonsági gyakorlatokat betartva (a WHO irányelvei szerint[1]) a COVID-19 gyanús esetmeghatározásának megfelelő betegektől, konzerválni és csomagolni. Nos, ha a diagnosztikai központba kell szállítani, majd gyorsan feldolgozni (az RNS kivonása egy BSL-2 vagy azzal egyenértékű létesítmény biológiai biztonsági szekrényében) a minta integritásának biztosítása érdekében. Mindezt elsőbbségi alapon kell végrehajtani a jobb klinikai kezelés és a járvány elleni védekezés érdekében.
A világ nagy diagnosztikai vállalatai által kifejlesztett különféle NAAT alapú tesztek észlelési ideje 45 perc és 3.5 óra között változik. Különböző fejlesztéseket hajtanak végre ezeken a teszteken, hogy azokat pont-gondozási tesztekké alakítsák át, és a kívánt eredményeket a lehető legrövidebb idő alatt érjék el anélkül, hogy az eredmény pontossága csökkenne, így növelve az egy nap alatt elvégezhető tesztek számát.
További diagnosztikai vizsgálati lehetőségek a következők gyors diagnosztikai tesztek (RDT) amelyek vagy kimutatják a SARS-CoV-2 vírusrészecskék felszínén expresszálódó vírusantigéneket/fehérjéket, amint azok a gazdasejtekben szaporodnak, és fertőzésre válaszul betegségeket vagy gazdaantitesteket okoznak; ez a teszt kimutatja az antitestek jelenlétét azon emberek vérében, akikről feltételezhető, hogy fertőzöttek COVID-19-cel (3).
Az RDT pontossága és reprodukálhatósága a vírusantigének kimutatására számos tényezőtől függ, beleértve a betegség kezdetétől eltelt időt, a vírus koncentrációját a mintában, a minta minőségét és feldolgozását, valamint a tesztkészletekben lévő reagensek összetételét. Ezen változók miatt ezeknek a teszteknek az érzékenysége 34% és 80% között változhat. Ennek az opciónak a fő hátránya, hogy a vírusnak replikációs és fertőző stádiumban kell lennie ahhoz, hogy kimutathassák a vírusfehérjéket.
Hasonlóképpen, a gazdaszervezet antitesteit detektáló tesztek az antitestválasz erősségén alapulnak, amely olyan tényezőktől függ, mint az életkor, a tápláltsági állapot, a betegség súlyossága és bizonyos gyógyszerek vagy fertőzések, amelyek elnyomják az immunrendszert. Ennek az opciónak a legnagyobb hátránya, hogy az antitestek a SARS-CoV-2 vírussal való fertőzés után napok vagy hetek alatt termelődnek, és ennyi ideig kell várni a teszt elvégzésére. Ez azt jelenti, hogy a COVID-19 fertőzés diagnosztizálása a gazdaszervezet antitestválasza alapján gyakran csak a felépülési szakaszban lehetséges, amikor a klinikai beavatkozás vagy a betegség terjedésének megelőzésének számos lehetősége már elmúlt.
Jelenleg a fent említett RDT-ket csak kutatási keretek között hagyták jóvá, és nem klinikai diagnózis céljából, az adatok hiánya miatt (3, 4). Ahogy egyre több epidemiológiai adat válik elérhetővé a COVID-19-re vonatkozóan, egyre több RDT-t fejlesztenek ki és hagynak jóvá klinikai környezetben végzett ellátási pontként, mivel ezek 10-30 perc alatt képesek eredményt adni, szemben a NAAT-alapú tesztekkel, amelyek átlagosan szükségesek. néhány óra a betegség kimutatására.
***
Referenciák:
1. WHO, 2020. Laboratóriumi vizsgálati stratégia ajánlásai a COVID-19-hez. Ideiglenes útmutató. 21. március 2020. Online elérhető a következő címen: https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/331509/WHO-COVID-19-lab_testing-2020.1-eng.pdf Hozzáférés dátuma: 09. április 2020
2. CDC 2020. Tájékoztató laboratóriumoknak. Ideiglenes Útmutató laboratóriumoknak online elérhető a következő címen: https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab/index.html Hozzáférés dátuma: 09. április 2020.
3. WHO, 2020. Tanácsok a Point of Care tesztek használatához. Tudományos tájékoztató. 08. április 2020. Online elérhető a következő címen: https://www.who.int/news-room/commentaries/detail/advice-on-the-use-of-point-of-care-immunodiagnostic-tests-for-covid-19 Hozzáférés dátuma: 09. április 2020.
4. ECDC, 2020. A COVID-19-diagnózis gyorstesztjének helyzetének áttekintése az EU-ban/EGT-ben. 01. április 2020. Európai Betegségmegelőzési és Járványvédelmi Központ. Elérhető online a címen https://www.ecdc.europa.eu/en/publications-data/overview-rapid-test-situation-covid-19-diagnosis-eueea Hozzáférés dátuma: 09. április 2020
***
